Transferibilidade de marcadores microssatélites para espécies silvestres de maracujazeiro
Silva, Lucas Pereira da Marostega, Thalita Neves Gilio, Thiago Alexandre Santana Serafim, Milson Evaldo Araújo, Kelly Lana Neves, Leonarda Grillo
Transferibilidade de marcadores microssatélites para espécies silvestres de maracujazeiro
Publicação online; 25 ref.; 3 tables; Summaries (En, Pt)
RESUMO: Marcadores moleculares permitem acompanhar o progresso de um programa de melhoramento genético. Marcadores SSR (simple sequence repeats), por serem codominantes, multialélicos e apresentarem alto polimorfismo, são ideais para estudos de criação de mapas gênicos, variabilidade e confirmação de retrocruzamentos. Porém, o uso deste tipo de marcador molecular é limitado, visto que são apenas disponíveis primers para espécies com expressão comercial. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a transferibilidade de 21 loci microssatélites desenvolvidos e desenhados de P.edulis e P. alatapara quatro espécies silvestres de Passiflora. As espécies utilizadas foram: P. cincinnata, P. quadrangularis, P. mucronata, e P. nitida. A extração de DNA foi realizada através do Kit Promega Wizard®. O protocolo de amplificação utilizado foi adaptado do proposto para o maracujazeiro comercial. Foram utilizados dezenove marcadores microssatélites desenhados para a espécie P. edulis e dois desenhados para P.alata. Os amplicons foram levados à eletroforese horizontal em gel de agarose a 3% e corados com o buffer Nancy 520. Os géis foram revelados em fotodocumentador digital e analisados. A transferibilidade foi verificada através da avaliação de presença ou ausência de banda. Os loci microssatélites projetados para P. edulis e P. alata mostraram-se transferíveis para ao menos uma das espécies com uma taxa altamente variável sendo, P. cincinnata (33,33%), P. quadrangularis (23,81%), P. mucronata (19,05%) e P. nitida (14,28%). Os marcadores PE13 e PE54 podem ser indicados para estudos de caracterização molecular por serem os únicos capazes de amplificar todas as espécies de maracujá silvestre estudadas.
PALAVRAS-CHAVE: Melhoramento de plantas, Simple sequence repeats, Amplificação, Polimorfismo
ABSTRACT: Molecular markers are tools that allow the monitoring of a breeding program progress. SSR (simple sequence repeats) markers are applied for genetic mapping studies, variability, assisted selection, crossing and backcrossing, because they are codominant, multiallelic and high polymorphic. However, the use of this type of molecular marker is limited, since primers are only available for commercially expressed species. Therefore, this work aimed to evaluate the transferability designed primers of Passiflora alata e Passiflora edulis to four wild species of Passiflora. The species used were: P. cincinnata, P. quadrangularis, P. mucronata and P. nitida. DNA extraction was done through the Promega Wizard® Kit. The amplification protocol used was the one proposed for P. alata and P. edulis with adaptations. Nineteen microsatellites designed for P. edulis and two designed for a genus P. alata were used. The amplicons were taken to horizontal electrophoresis in a 3% agarose gel, followed by staining with Nancy 520 buffer and the revelation was developed in a digital photodocumentator with UV light. The transferability was verified through the evaluation of band presence or absence. The microsatellites loci designed for P. edulis and P. alata were transferable for the examination of at least one species with high variable rate: P. quadrangularis (23.81%), P. cincinnata (33.33%), P. quadrangularis (23.81%), P. mucronata (19.05%) and P. nitida (14.28%). Markers PE13 and PE54 can be selected for molecular characterization studies because they are the only ones able to amplify all the wild passion fruit species tested.
KEYWORDS: Plant breeding, Simple sequence repeats, Amplification, Polymorphism
MARACUJÁ
MARCADOR MOLECULAR
POLIMORFISMO
MELHORAMENTO GENÉTICO VEGETAL
Transferibilidade de marcadores microssatélites para espécies silvestres de maracujazeiro
Publicação online; 25 ref.; 3 tables; Summaries (En, Pt)
RESUMO: Marcadores moleculares permitem acompanhar o progresso de um programa de melhoramento genético. Marcadores SSR (simple sequence repeats), por serem codominantes, multialélicos e apresentarem alto polimorfismo, são ideais para estudos de criação de mapas gênicos, variabilidade e confirmação de retrocruzamentos. Porém, o uso deste tipo de marcador molecular é limitado, visto que são apenas disponíveis primers para espécies com expressão comercial. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a transferibilidade de 21 loci microssatélites desenvolvidos e desenhados de P.edulis e P. alatapara quatro espécies silvestres de Passiflora. As espécies utilizadas foram: P. cincinnata, P. quadrangularis, P. mucronata, e P. nitida. A extração de DNA foi realizada através do Kit Promega Wizard®. O protocolo de amplificação utilizado foi adaptado do proposto para o maracujazeiro comercial. Foram utilizados dezenove marcadores microssatélites desenhados para a espécie P. edulis e dois desenhados para P.alata. Os amplicons foram levados à eletroforese horizontal em gel de agarose a 3% e corados com o buffer Nancy 520. Os géis foram revelados em fotodocumentador digital e analisados. A transferibilidade foi verificada através da avaliação de presença ou ausência de banda. Os loci microssatélites projetados para P. edulis e P. alata mostraram-se transferíveis para ao menos uma das espécies com uma taxa altamente variável sendo, P. cincinnata (33,33%), P. quadrangularis (23,81%), P. mucronata (19,05%) e P. nitida (14,28%). Os marcadores PE13 e PE54 podem ser indicados para estudos de caracterização molecular por serem os únicos capazes de amplificar todas as espécies de maracujá silvestre estudadas.
PALAVRAS-CHAVE: Melhoramento de plantas, Simple sequence repeats, Amplificação, Polimorfismo
ABSTRACT: Molecular markers are tools that allow the monitoring of a breeding program progress. SSR (simple sequence repeats) markers are applied for genetic mapping studies, variability, assisted selection, crossing and backcrossing, because they are codominant, multiallelic and high polymorphic. However, the use of this type of molecular marker is limited, since primers are only available for commercially expressed species. Therefore, this work aimed to evaluate the transferability designed primers of Passiflora alata e Passiflora edulis to four wild species of Passiflora. The species used were: P. cincinnata, P. quadrangularis, P. mucronata and P. nitida. DNA extraction was done through the Promega Wizard® Kit. The amplification protocol used was the one proposed for P. alata and P. edulis with adaptations. Nineteen microsatellites designed for P. edulis and two designed for a genus P. alata were used. The amplicons were taken to horizontal electrophoresis in a 3% agarose gel, followed by staining with Nancy 520 buffer and the revelation was developed in a digital photodocumentator with UV light. The transferability was verified through the evaluation of band presence or absence. The microsatellites loci designed for P. edulis and P. alata were transferable for the examination of at least one species with high variable rate: P. quadrangularis (23.81%), P. cincinnata (33.33%), P. quadrangularis (23.81%), P. mucronata (19.05%) and P. nitida (14.28%). Markers PE13 and PE54 can be selected for molecular characterization studies because they are the only ones able to amplify all the wild passion fruit species tested.
KEYWORDS: Plant breeding, Simple sequence repeats, Amplification, Polymorphism
MARACUJÁ
MARCADOR MOLECULAR
POLIMORFISMO
MELHORAMENTO GENÉTICO VEGETAL
BINAGRI