Real-time PCR for detection of Brucella ovis and Histophilus somni in ovine urine and semen
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Em: Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia (Brazil) v. 67(6) p. 1751-1755; (2015)Sumário:
RESUMO - A epididimite infecciosa ovina é uma das principais enfermidades reprodutivas de carneiros. O presente estudo teve por objetivo desenvolver protocolos de PCR em tempo real para B. ovis e H. somni e avaliar sua aplicabilidade em amostras de sêmen e urina de carneiros. Delinearam-se primers e sondas espécieespecíficos para cada agente. As sondas foram delineadas com o sistema TaqMan incorporando um marcador FAM para B. ovis e Cy5 para H. somni na extremidade 5' e um quencher na extremidade 3'. A PCR em tempo real para B. ovis e H. somni foi altamente sensível, uma vez que a amplificação de DNA ocorreu com até 0,2ng de DNA/reação. A especificidade dos iniciadores e sondas foi avaliada com amostras de DNA de outros agentes causadores de epididimite ovina e nenhuma amplificação inespecífica foi observada. A aplicabilidade da técnica em amostras biológicas também foi confirmada, pois não houve perda de eficácia (P>0,05) quando comparada à PCR convencional com amostras de sêmen e urina de carneiros experimentalmente infectados.
Palavras-chave: epididimite infecciosa, ovinos, diagnóstico, PCR
| Tipo de material | Biblioteca atual | Coleção | Número de chamada | Informaçaõ do volume | Situação | Devolução em | Código de barras |
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Periódicos
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Biblioteca Nacional de Agricultura - Binagri Agrobase - Periódicos | Periódicos agrícolas | 2015 67(6) | Não pode ser emprestado | 2024-2263 |
Publicação online; 12 ref.; 2 tables; Summary (Pt)
RESUMO - A epididimite infecciosa ovina é uma das principais enfermidades reprodutivas de carneiros. O presente estudo teve por objetivo desenvolver protocolos de PCR em tempo real para B. ovis e H. somni e avaliar sua aplicabilidade em amostras de sêmen e urina de carneiros. Delinearam-se primers e sondas espécieespecíficos para cada agente. As sondas foram delineadas com o sistema TaqMan incorporando um marcador FAM para B. ovis e Cy5 para H. somni na extremidade 5' e um quencher na extremidade 3'. A PCR em tempo real para B. ovis e H. somni foi altamente sensível, uma vez que a amplificação de DNA ocorreu com até 0,2ng de DNA/reação. A especificidade dos iniciadores e sondas foi avaliada com amostras de DNA de outros agentes causadores de epididimite ovina e nenhuma amplificação inespecífica foi observada. A aplicabilidade da técnica em amostras biológicas também foi confirmada, pois não houve perda de eficácia (P>0,05) quando comparada à PCR convencional com amostras de sêmen e urina de carneiros experimentalmente infectados.
Palavras-chave: epididimite infecciosa, ovinos, diagnóstico, PCR
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