Publicação online; 39 ref.; 6 illus.; 4 tables; (Summaries (En, Pt)

Abstract - The best conditions for in vitro sucrose hydrolysis based on invertase from Candida guilliermondii (ICg) were studied and the kinetic parameters KM, Vmax, and thermal stability of ICg were determined. Candida guilliermondii (Cg) yeast isolated and lyophilized from peach solid wastes was identified using the API 20C AUX method. Subsequently, the Cg was submitted to an autolysis process using NaHCO3 at 200 mM under 200 rpm stirring and 40 °C for 24 h. The enzyme extracts obtained were recovered through precipitation with acetone followed by dialysis and ion-exchange chromatography. The extract purified through precipitation with acetone had activity of 27.7 U.mg-1 and 56% recovery whereas the chromatography process yielded 46.5 U.mg-1 and 44.8%. The optimal sucrose hydrolysis conditions were pH 5.0 and 50 °C, resulting in KM of 30.5 mM and 28.7 mM sucrose, respectively, at 25 °C and 50 °C, both with Michaelian behavior. Thermal inactivation of ICg exhibited first-order apparent kinetics and its residual activity was typically linear between 40 °C and 70 °C. Three isoenzymes were detected through electrophoresis.


Index terms: Yeast; autolysis; isoenzymes; inverted sugar.

Resumo - Estudaram-se as melhores condições de hidrólise da sacarose in vitro a partir da invertase de Candida guilliermondii (ICg), também se determinou os parâmetros cinéticos KM, Vmax e a estabilidade térmica da ICg. A levedura Candida guilliermondii (Cg) extraída, isolada e liofilizada de resíduo de pêssego foi identificada usando o método API 20C AUX. Posteriormente, a levedura Cg foi submetida a um processo de autólise, usando NaHCO3 a 200 mM sob agitação a 200 rpm e 40°C, por período de 24 horas. Os extratos enzimáticos obtidos foram recuperados por precipitação com acetona seguido de diálise e cromatografia de troca iônica. O extrato purificado por precipitação com acetona teve a atividade de 27,7 U.mg-1 e 56% de recuperação, sendo que, por cromatografia, obtiveram-se 46,5 U.mg-1 e 44,8%. As condições ótimas na hidrólise da sacarose foram pH de 5,0 e 50°C, apresentando KM de 30,5/mM e 28,7 mM de sacarose, respectivamente, a 25°C e a 50°C, ambas com comportamento Michaeliano. A inativação térmica da ICg mostrou uma cinética aparente de primeira ordem, e sua atividade residual foi tipicamente linear entre 40°C - 70°C. Por meio de eletroforese, foram detectadas três isoenzimas.



Termos para indexação: Levedura; autólise; isoenzimas; açúcar invertido.